細(xì)胞色素b5含量測(cè)試盒
測(cè)定方法: 微量法
測(cè)定規(guī)格: 100T/96S
保存條件: 低溫避光保存
有 效 期: 6個(gè)月
注 意: 正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義:
細(xì)胞色素P450酶是一組主要存在于肝臟的同工酶,在外源物質(zhì)代謝中具有重要作用,尤其是和毒物的代謝。細(xì)胞色素P450和細(xì)胞色素b5是P450酶系的兩個(gè)血紅素蛋白,其比值的變化與P450代謝活性密切相關(guān)。
測(cè)定原理:
氧化型細(xì)胞色素b5經(jīng)連二亞硫酸鈉還原后,在424nm處有 吸收峰,通過測(cè)定424nm和490nm處吸光值的差異,即可計(jì)算出細(xì)胞色素b5的含量。
自備儀器和用品:
普通離心機(jī),超速離心機(jī)、可調(diào)式移液槍、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、和蒸餾水。
樣品中細(xì)胞色素b5提取:
1、除去細(xì)胞核,線粒體等大分子物質(zhì):稱約0.5g組織,加入1mL試劑一,冰上充分研磨,10 000g 4℃離心30min,取上清液,轉(zhuǎn)入超速離心管中。
2、粗制微粒體:100 000g,4℃離心60min,棄上清液。
3、除血紅蛋白等雜質(zhì):向步驟2的沉淀中加1mL試劑一,蓋緊后充分震蕩溶解,100 000g離心30min,棄上清液。
4、待測(cè)液:向步驟3的沉淀中加試劑二0.5mL,蓋緊后充分震蕩溶解,即待測(cè)液,該待測(cè)液需當(dāng)天測(cè)定。
