丙酮酸(PA)含量測(cè)試盒
測(cè)定方法: 微量法
測(cè)定規(guī)格: 100管/96樣
保存條件: 低溫避光保存
有 效 期: 6個(gè)月
注 意 : 正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義:
丙酮酸通過乙酰CoA 連接葡萄糖、脂肪酸和氨基酸三大代謝,起著重要的樞紐作用。測(cè)定原理:
丙酮酸與2,4-二硝基苯肼作用,生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙,在堿性溶液中呈顯色。需自備的儀器和用品:可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰、蒸餾水。
丙酮酸提取:
1、培養(yǎng)細(xì)胞:先收集或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照或細(xì)胞數(shù)量(104 個(gè)):提取液體積(mL)為500~1000:1 的比例(建議500 萬(wàn)或細(xì)胞加入1mL 提 取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30 次),靜置30min, 8000g,25℃離心10min,取上清待測(cè)。
2、組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10 的比例(建議稱取約0.1g 組織,加入1mL 提取液),進(jìn)行冰浴勻漿,靜置30min,8000g,25℃離心10min,取上清待測(cè)。3、血清(漿)樣品:按照血清(漿)體積(mL):提取液體積(mL)為1:5~10 的比例(建
議取0.1mL 血清(漿)加入1mL 提取液),進(jìn)行冰浴勻漿,靜置30min, 8000g,25℃離心10min,取上清待測(cè)。