脂肪酸合成酶(FAS)測試盒
測定方法: 微量法
測定規(guī)格: 100T/96S
保存條件: 低溫避光保存
有 效 期: 6個月
注 意 : 正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義:
FAS是脂肪酸合成關(guān)鍵酶,催化乙酰輔酶A和丙二酰輔酶A而生成長鏈脂肪酸。FAS普遍表達(dá)于各種組織細(xì)胞中,在哺乳動物肝、腎、腦、肺和乳腺以及脂肪組織中表達(dá)豐富。
測定原理:
FAS催化乙酰CoA、丙二酰CoA和NADPH生成長鏈脂肪酸和NADP+;NADPH在340nm有吸收峰,而NADP+沒有;通過測定340nm 光吸收下降速率,計算FAS活性。
自備儀器和用品:
研缽、冰、臺式離心機(jī)、紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍和蒸餾水。
粗酶液提取:
1.組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進(jìn)行冰浴勻漿。12000g,4℃離心40min,取上清置冰上待測。
2. 按照細(xì)胞數(shù)量(104個):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后12000g,4℃,離心40min,取上清置于冰上待測。
3.血清等液體:直接測定。
FAS測定操作:
1. 分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min,調(diào)節(jié)波長到340 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑四置于40℃水浴中預(yù)熱30 min。
3. 在96孔板或EP管中依次加入20μL上清液、4μL試劑二、4μL試劑三、164μL試劑四和8μL試劑五,混勻后于340nm處測定吸光值,記錄第30s和90s時吸光值,分別記錄為A1和A2?！鰽測=A1-A2。
