糖原磷酸化酶b(GPb)測(cè)試盒
測(cè)定方法: 分光光度法
測(cè)定規(guī)格: 50管/24樣
保存條件: 低溫避光保存
有 效 期: 6個(gè)月
注 意: 正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義:
糖原磷酸化酶(Glycogen phosphorylase,GP,EC 2.4.1.1))是糖原分解代謝的關(guān)鍵酶,使糖原分子從非還原端逐個(gè)斷開(kāi)α-1,4-糖苷鍵移去葡萄糖基,釋放1-磷酸葡萄糖,直至臨近糖原分子α-1,6-糖苷鍵分支點(diǎn)前4個(gè)葡萄糖基處。GP分為有活性的糖原磷酸化酶a(GPa)和無(wú)活性的糖原磷酸化酶b(GPb)兩種形式。GPb在一定濃度的腺苷酸(5,-AMP)存在下可被激活。
測(cè)定原理:
GP催化糖原和無(wú)機(jī)磷產(chǎn)生葡萄糖殘基生成糖原和1-磷酸葡萄糖,磷酸葡萄糖變位酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶進(jìn)一步依次催化NADP還原生成NADPH,在340nm下測(cè)定NADPH上升速率,即可反映GP活性。添加一定濃度的腺苷酸(5,-AMP)時(shí)測(cè)定GP(GPa和GPb)活性,未添加腺苷酸(5,-AMP)時(shí)測(cè)定GPa活性,GP活性-GPa活性得到GPb活性。
需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
提取液:60mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:液體40 mL×1瓶, 4℃保存;
試劑二:粉劑×1瓶,-20℃保存;
試劑三:粉劑×1支,-20℃保存;
試劑四:粉劑×1支, -20℃保存;
試劑五:粉劑×1支, -20℃保存;