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產(chǎn)品詳情

  • 產(chǎn)品名稱：Negishi病毒RT-PCR試劑盒

  • 產(chǎn)品型號(hào)：50次
  • 產(chǎn)品廠商：通蔚生物
  • 產(chǎn)品價(jià)格：3490
  • 產(chǎn)品庫存：100
  • 產(chǎn)品文檔：
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簡單介紹：
Negishi病毒RT-PCR試劑盒根據(jù)Negishi病毒的保守基因序列設(shè)計(jì)的引物，具有良好的特異性。靈敏度可以達(dá)到 1000 拷貝/反應(yīng)。使用一管式 RT-PCR 技術(shù)，RT 和 PCR 兩步在一個(gè)試管內(nèi)完成，不需要中間轉(zhuǎn)移樣品，降低了操作誤差和可能的污染。本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的 RT-PCR。本產(chǎn)品只能用于科研，不能用于臨床。
詳情介紹：
產(chǎn)品及特點(diǎn)： 
1. 一站式，用戶不需要單獨(dú)準(zhǔn)備每種成分，包括引物和對(duì)照。
2. 根據(jù)Negishi病毒的保守基因序列設(shè)計(jì)的引物，具有良好的特異性。
3. 靈敏度可以達(dá)到 1000 拷貝/反應(yīng)。
4. 使用一管式 RT-PCR 技術(shù)，RT 和 PCR 兩步在一個(gè)試管內(nèi)完成，不需要中間轉(zhuǎn)移樣品，降低了操作誤差和可能的污染。
5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的 RT-PCR。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研，不能用于臨床。
規(guī)格及成分：

編號(hào)

成分

規(guī)格

試劑一

5×雙酶一管式 RT-PCR Buffer

200 μL（橘黃蓋）

試劑二

MMLV-Taq Mix

75 μL（紅蓋）

試劑三

超純水

1 mL（亮黃蓋）

試劑四

Negishi病毒 RT-PCR 引物混合液

100 μL（白蓋）

試劑五

Negishi病毒 RT-PCR 陽性對(duì)照（1×10E8 /μL）

50 μL（黃蓋）

試劑六

使用手冊(cè)

1 份

注：為避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照，只提供專一的DNA 片段作為陽性對(duì)照。 
運(yùn)輸及保存：
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為 12 個(gè)月。收到貨后陽性對(duì)照需要跟其他成分分開放置，因?yàn)槠淙菀孜廴酒渌煞?，造成假陽性?/span>
自備試劑：
樣品 RNA。

Negishi病毒RT-PCR試劑盒

使用方法：

一、樣品 DNA 的制備：
1. 如果有 N 個(gè)樣品，必須設(shè)置 N+2 個(gè)提取，多出的一個(gè)是 PC（樣品制備陽性對(duì)照），一個(gè)是NC（樣品制備陰性對(duì)照）?？梢杂?10μL Negishi病毒 PCR陽性對(duì)照的 1000 倍稀釋液作為制備的陽性對(duì)照。可以用水作為制備的陰性對(duì)照。制備所得成為樣品 RNA。
2. 用自選方法純化 N+2 個(gè)樣品的 RNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 RNA 提取試劑盒兼容。可以選購本公司的柱式病毒 RNAout。
二、設(shè)置RT- PCR 反應(yīng)(20μL 體系)：
3. 如果有 N+2 個(gè)樣品，則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管(額外增加的兩個(gè)管一個(gè)是RT-PCR 陽性對(duì)照，另一個(gè)是 RT-PCR 陰性對(duì)照)并按照下表在 PCR 管中加入下列成分：

成份

N+2 個(gè)

樣品管

RT-PCR

陰性對(duì)照

RT-PCR

陽性對(duì)照

5×雙酶一管式RT-PCR Buffer

各 4 μL

4 μL

4 μL

Negishi病毒 RT-PCR 引物混合液

各 2 μL

2μL

2μL

N+2 個(gè)制備的 RNA 樣品

各 12.5μL

--

--

超純水

--

12.5μL

--

Negishi病毒 RT-PCR 陽性對(duì)照的 1000倍稀釋液

--

--

12.5μL

MMLV-Taq Mix

1.5 μL

1.5 μL

1.5 μL

4.上機(jī)進(jìn)行 RT-PCR，RT-PCR 反應(yīng)參數(shù)為:

過程

溫度

時(shí)間

逆轉(zhuǎn)錄

42℃

30 min

預(yù)變性

95℃

5 min

PCR反應(yīng)35個(gè)循環(huán)

95℃

30 sec

58℃

30 sec

72℃

20 sec

延伸

72℃

7 min

三、電泳檢測：
5. 瓊脂糖電泳檢測擴(kuò)增效果。如果陰性對(duì)照有擴(kuò)增產(chǎn)物或陽性對(duì)照無擴(kuò)增產(chǎn)物，則說明實(shí)驗(yàn)失敗，需要分析實(shí)驗(yàn)失敗的原因。只有在陰性對(duì)照沒有擴(kuò)增產(chǎn)物、陽性對(duì)照必須有預(yù)期條帶出現(xiàn)，才有必要分析樣品的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，如果有預(yù)期片段大小的擴(kuò)增產(chǎn)物則為陽性，如果無則為陰性。 
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